支原体检测的核酸法,已广泛应用于细胞支原体筛查和生物制品企业的生产放行检测中。
但在使用PCR方法检测支原体之前,由于有些待检样品的成分过于复杂,或含有的某些成分会抑制PCR反应的进行,因此需要使用『支原体DNA提取试剂盒』提前做DNA的提取工作。
对于生物药或需遵循药典的样本,也由于样品基质可能会影响检测的灵敏度,因此需要样本做DNA抽提处理,实现核酸法最高的灵敏度。
这里向您推荐德国MB公司生产的专用支原体DNA提取试剂盒
英文品名:
Venor®GeM Sample Preparation Kit
该试剂盒已经过多方广泛验证,有很多引用文献;
它已达到欧洲药典标准,可用于PCR或qPCR检测支原体的方法学验证。
1、产品信息:
2、产品特点
1)符合欧洲药典的要求。
2)采用离心管柱的方法,全程只需30分钟。
2)从细胞上清和生物制品中,均可分离支原体DNA。
3)洗脱DNA纯度高,体积50μl,保证PCR最大的灵敏度。
3、操作步骤
四步法:
1)细胞裂解
2)DNA吸附到核酸纯化柱上
3)去除残留污染物和抑制剂
4)DNA洗脱
试剂盒组分:
Spin columns(核酸纯化住)
Collection tubes(收集管)
Conditioner液
Binding Buffer液
Buffer A1液
Buffer A2液
Buffer E液
操作示意图:
4、所需其他材料及仪器:
>96%无水乙醇
EP管(1.5ml或2ml)
离心机和恒温仪(用于1.5ml 或2ml 离心管)
移液器及带滤芯吸头(100μl 和1000μl)
可选:蛋白酶K(货号56-0002),用于处理富含蛋白(>10mg/ml)的样品。
可选:DNA 内控对照,用于配合
Venor®GeM Classic Kit(货号11-1025)
或Venor®GeM qEP Kit(货号11-9025),
以保证操作过程没有问题。
5、注意事项:
1. 支原体DNA 提取试剂盒一次可从最多含有1X 106 细胞/ml 的细胞上清中直接分离DNA。
2. 富含蛋白的样本(蛋白含量>10mg/ml)可能需要蛋白酶K 处理后,再抽提DNA。
3. 此试剂盒不适于提取真核细胞组织的DNA。
4. 若在提取DNA时加入了内控DNA对照,则在支原体核酸法检测时不需要再加内控对照。我们推荐使用对照,以验证结果的可靠性,也有助于排除故障。
5. 不要使用其他酒精来替代乙醇,它将导致核酸产量的下降。
6. 缓冲液E(Buffer E)的预热,会显著改善核酸的产量。
德国MB公司简介:
德国MB公司,全称Minerva Biolabs,是世界著名的微生物污染控制公司,成立于1999年,总部位于德国柏林。
公司创始人来自于全球闻名的罗伯特•科赫微生物研究所。
二十年来,MB公司专注于微生物污染检测与清除,
特别是支原体和军团菌的技术和产品,在世界上遥遥领先。
* 自1999年起即研发细胞培养和生物药工业用QC检测试剂
* 配备生物安全二级实验室
* GMP级洁净车间生产
* 世界最大的支原体PCR检测试剂供应商
* IOM和PDA成员
* ISO 9001和ISO 13485认证
注:IOM全称Institute of Medicine
PDA全称Parenteral Drug Association
2007年,上海威正翔禹生物科技有限公司作为MB公司的全国总代理,将支原体检测防控的优秀产品引入中国。十几年来,不断为中国生物研究实验室,以及众多生物制药企业,提供了完整高效的支原体等微生物检测及祛除解决方案。
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