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细胞被支原体污染后的清除策略

来源:威正翔禹|缔一生物发布时间:2021-01-19阅读次数: 收藏

概述:在细胞培养过程中,支原体感染发生率达到63%,因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。本文缔一生物为您分析细胞被支原体污染后的清除策略。

细胞培养中常遇见的有细菌污染、真菌污染、支原体污染、病毒污染等。

说起支原体污染,估计细胞培养的同学就开始犯愁了,细胞培养的老手都知道,支原体污染非常不易察觉。有的实验室被支原体污染后,如果不进行有效彻底的支原体清除,该实验的细胞培养很难进行下去,细胞传代3代以后状态就急剧下滑,无法进行正常实验,有的实验室甚至只能指望换细胞间。那么怎样才能有效检测并清除支原体污染呢?

支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。细胞培养工作中,主要从以下几个方面来预防支原体的污染:控制环境污染;严格实验操作;细胞培养和器材要保证无菌;在细胞培养中加入适量的抗生素。

1、支原体检测


荧光定量PCR法(qPCR):是在常规PCR基础上,将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记,使PCR扩增后的产物带有荧光,利用荧光信号的变化和配套软件,进行DNA扩增反应的实时监测,简称qPCR。

优点:①灵敏度高、特异性强。

          ②时间短,2-3小时出结果。

          ③检测结果可定量。

          ④操作简便。

缺点:①对于已做支原体灭活处理的样品,由于支原体DNA仍旧存在其中,PCR结果会出现假阳性。(可用培养法做补充验证)

          ②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大(由于引物及内在设计不同),需谨慎选择,尽量在专业人员推荐指导下使用。

德国MB公司生产的支原体qPCR检测试剂盒(均为探针法检测),依据操作步骤的细微差别,

分『经典法』和『一步法』两种。    


2、环境空间消毒方案


试验台、超净台、培养箱、液氮罐、移液器、门把手、电话等细胞培养环境

被支原体污染,可引起细胞的污染。应定期对工作区域进行消毒。



德国MB生产的Mycoplasma-offTM喷雾剂,或湿巾擦拭 5-10分钟清除,对支原体、细菌、真菌、霉菌、孢子祛除确切有效。无残留, 无腐蚀, 无致癌性,操作简单方便。


(缔一生物)


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