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支原体qPCR检测的仪器设置和注意事项

来源:威正翔禹|缔一生物发布时间:2021-02-05阅读次数: 收藏

目前在市场上,有一款支原体qPCR检测试剂盒

(英文品名:Venor®Gem qEP,厂家:德国MB) 广受药厂的欢迎。

该试剂盒

经过全面的方法学验证,符合欧洲药典和日本药典要求,

适合细胞治疗、CAR-T、抗体药、疫苗等药厂的

过程控制、放行检测以及临床申报。

 要用好该试剂盒,除了严格遵循说明书的操作外,还有些注意事项,下面小编向您介绍一下。


一、仪器的设置

要注意你所用的qPCR仪有几个通道,是否可检测相应的荧光素。


MB的支原体qPCR检测试剂盒(英文名:Venor®Gem qEP)适用的荧光定量PCR仪的机型广泛,相关设置可从缔一生物网站下载。

(链接:http://www.dyshengwu.com/cn/info_19.aspx?itemid=1881&lcid=310)


二、基线设置

许多qPCR仪软件有自动基线设置功能。

但要注意,有时也需要查看原始荧光数据,了解各个样本的基线水平。

如下图图1,有一些样本的基线水平较高,就提示这些样本可能存在一定的数据偏差或操作错误。

图1. 基线校正前的曲线


三、阈值设置

许多qPCR仪软件有自动阈值设置功能。但也应关注一下,仪器自动设定的阈值线是否合适。这需要一定的经验。


如果阈值设定太低,会使灵敏度最大化,增加假阳性的可能;

如果阈值设定太高,可能会影响灵敏度并导致假阴性。

图2和图3就是一个例子。

图2. ABI 7500自动阈值的设定。

图3.   ABI 7500手动阈值的设定(荧光最大值的5%)


在图2中,有2个样本为支原体阳性(黄线和红线)。

在图3中,这2个样本中有一个变为阴性了(红线)。

总之,阈值设定,如果是软件自动设置,应再看一下阈值线的位置是否合适。必要时可进行手动设置。


以上就是支原体qPCR检测的仪器设置和注意事项,如果您还想了解更多的信息,可咨询德国MB中国区总代理北京缔一生物科技有限公司。


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(缔一生物)


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