细胞支原体检测试剂盒PCR法使用方法

支原体不同于细菌，也不同于病毒，种类繁多，分布广泛，造成的危害相当大，涉及人、动物、植物及昆虫等多个领域，给人类健康和科研工作带来不利影响。在科研基础细胞实验中很有必要对新引进的细胞和实验过程中的细胞株使用细胞支原体检测试剂盒对其进行支原体检测。

北京缔一生物科技有限公司国内总代理的德国MB产品细胞支原体检测试剂盒PCR法（经典法）(含Taq酶） Venor Gem Classic

细胞支原体检测试剂盒PCR法（经典法）(含Taq酶）特点

1.内控对照为独立包装，遵循欧洲药典和日本药典操作流程。

2.高特异性，仅一条阳性对照条带，即可涵盖所有可能感染细胞的支原体物种。操作简单，

易于观察。

3.高灵敏度，若PCR反应体系加入10μl样本，支原体检测限度为≤5或≤10CFU。

4.欧洲药典要求的26种支原体均可检出。该试剂盒可检测出1种脲原体、7种无胆甾原体和85种支原体，与细菌和真核DNA无交叉反应。

5.试剂盒内包含Taq酶，无需另外购买。

细胞支原体检测试剂盒PCR法（经典法）(含Taq酶）操作步骤

第1步：样本处理

a.细胞培养上清

b.生物药或需遵循药典的样本

说明：①样品基质可能会影响检测的灵敏度。收集和筛选更高的样品量可提高测定灵敏度。

    ②细胞培养物样本含丰富的DNA酶，在低温下也能降解支原DNA，影响检测灵敏度。

建议：样本做DNA抽提处理，实现最高灵敏度。

推荐：德国MB公司生产的专用支原体DNA提取试剂盒Venor® Gem Sample Preparation Kit该DNA抽提试剂盒已经过广泛验证。

第2步：试剂制备

第3步：PCR体系建立

a. 细胞培养上清

b.生物药或需遵循药典的样本

第4步：启动PCR反应

第5步：电泳结果分析

191bp为内控对照条带，表明PCR反应正常。 当样本存在支原体污染时，由于内控对照与支原体DNA存在竞争，内控对照条带变弱（例如支原体DNA＞10^3拷贝）。 阳性对照中支原体DNA＞

10^4拷贝，内控对照条带会完全消失。 可能在80-90bp存在引物自退火形成的条带，此条带不影响检测结果。 如果待测样本对PCR产生抑制，则内控对照条带变弱（和阴性对照相比），此时应先进行DNA抽提（推荐使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原体DNA抽提试剂盒，详见第25页），然后再检测。

储存条件

2~8℃至少6个月。复溶后在-18℃保存。

北京缔一生物科技有限公司国内总代Ausbian品牌,德国Minerva-Biolabs微生物污染控制系列。细胞培养实验使用的Ausbian澳洲进口特级胎牛血清,新生牛血清，干细胞培养基,马血清，德国MB支原体检测/祛除试剂盒,DNA污染祛除试剂,支原体PCR/qPCR定量试盒等产品。欢迎访问缔一生物官网：www.dyshengwu.com。联系电话:4006661688。