三把利器快速解决细胞房支原体污染

支原体又称霉形体，支原体缺乏细胞壁，大小介于细菌与病毒两者之间，能通过滤菌器，在无生命培养基上有强大的繁殖能力，是现在最小的原核细胞型微生物。对科研实验室和生物制品工厂在细胞培养过程中特别容易受到支原体污染，有很多文献报道称，支原体污染在储存细胞系中发生率约为15-35%，在生物制药行业中约为0.44-6.70%。

细菌和真菌污染相对较容易检测、预防和去除，但支原体造成的污染却很难察觉，即使生长密度高达107-109CFU/ml，也很难有污染迹象（比如溶液浑浊、pH变化等）。支原体污染后能导致细胞产生多种变化：细胞死亡、抑制细胞生长、改变新陈代谢、改变细胞膜抗原性、染色体畸变、干扰核酸的合成、改变转染的效率、抑制病毒的生产。德国Minerva Biolabs GmbH 公司在细胞培养和生物制药领域的支原体、细菌和病毒污染控制收全球科研人好评，有完整的解决支原体问题的试剂，包括：支原体检测系列、支原体清除（培养箱、水浴锅、超净台和细胞房）、细胞支原体清除和支原体预防相关系列。

一、支原体DNA提取试剂盒

二、支原体检测试剂盒

（一）常规PCR方法

（二）荧光定量PCR(qPCR)方法

二、方法验证用支原体标准品（替代药典方法需要验证）

（一）灵敏度验证用标准品

（二）支原体基因组DNA（拷贝数已标定）

（三）支原体基因组DNA（特异性验证用）

三、方法验证辅助产品

　四、支原体祛除

     一、细胞支原体祛除剂

　　Zell Shield®支原体祛除剂（培养基用）‍　　英文名：Zell Shield®

　　品牌：德国MB1. 适用范围

　　（1）细胞已发生支原体污染，但又不愿丢弃，希望继续培养（如已转染或大量扩增的细胞）。

　　（2）初始培养的原代细胞。

　　（3）存在支原体污染高风险的细胞。

　　2. 用法：

　　（1）1:100加入培养基。

　　（2）当细胞存在支原体污染时，应先对细胞悬浮冲洗三次，再用含Zell Shield®培养基培养。每次传代前都应做悬浮冲洗处理。连续传代4次，支原体即可祛除。
     

　　Mynox® Gold支原体祛除剂（珍贵细胞保种用）‍　　英文名：Mynox® Gold

　　品牌：德国MB1. 适用范围

　　被支原体污染的珍贵细胞或不易获得的生物样本（如细胞种子）。

　　2. 用法：

　　步骤1. 将「治疗液」加入到4.5ml培养基（FBS需≤5%）中，培养细胞（细胞数为104~105）。

　　步骤2. 细胞长至80%-90%汇合时，细胞传代。将1管「巩固防护液」加到9.5ml培养基中，用该培养基继续培养。

　　步骤3. 重复步骤2，细胞再传代2次，支原体即完全祛除。

　　注意：每次传代时，**都能把细胞悬浮冲洗三次，可取得更好的治疗效果

　　Mynox支原体祛除剂（珍贵样本用）‍　　英文名：Mynox®

　　品牌：德国MB1. 适用范围

　　被支原体污染的珍贵细胞、不易获得的生物样本或病毒收获液（特别是不能长期培养的样品）。

　　2. 用法：

　　（1）对于贴壁细胞：

　　步骤1. 培养皿中加入200μl Mynox®和 2.8ml培养基中（FBS≤5%），混匀。

　　步骤2. 再加入2ml细胞（细胞数为104~105，培养基中的FBS需≤5%）。

　　步骤3. 细胞培养2小时，弃上清，换用新鲜培养基培养4代即可。

　　（2）对于悬浮细胞：

　　步骤1. 在离心管中加入200μl Mynox®和1.6ml胰酶（0.125 %，5 mM EDTA in PBS），混匀。

　　步骤2. 加入1.6ml细胞（细胞数为104~105）。

　　步骤3. 室温静置30min。

　　步骤4. 600×g离心5min。弃上清，换用新鲜培养基培养4代即可。10-02002管/盒

　　二、工作区域中支原体的祛除

　　品名用途和用法货号规格

　　MB支原体祛除喷雾‍　　英文名：Mycoplasma-OffTM

　　品牌：德国MB用途：实验环境（如实验台、超净台、培养箱、仪器设备）、无菌车间和洁净生产线的支原体的祛除，对清除支原体、细菌、真菌（含真菌孢子）和多种病毒污染均有效。

　　2. 用法：喷雾剂喷洒待消毒的表面，等待5-10min后，用干净纸巾擦拭。通风2-3分钟。

　　MB支原体祛除湿巾‍　　英文名：Mycoplasma-OffTM Wipes

　　品牌：德国MB1. 用途：应用于电子设备、门把手、电话、移液器表面的支原体的祛除，对支原体、细菌、真菌（含真菌孢子）和多种病毒均有效。

　　用法：用湿巾擦拭后，应让被消毒物体的表面保持湿润，再让其自然风干。

　　三、培养箱水槽、水浴锅中支原体的预防

　支原体祛除剂（水槽用）‍　　英文名：Water ShieldTM

　　品牌：德国MB

   1. 用途：预防培养箱水槽、水浴锅的支原体、细菌和真菌污染。

　　2. 用法：

　　步骤1. 本品按1:200比例加入到蒸馏水中，如1L蒸馏水+5ml Water ShieldTM

　　步骤2. 加入Water ShieldTM的蒸馏水可直接加入到培养箱水槽或水浴锅中，

　　步骤3. 4周左右清洗水槽，换水，重新加入Water ShieldTM。

　　需要了解更多产品详情或工作原理，可登录北京缔一生物官网查询，或联系本文发布作者。