qPCR(实时荧光定量PCR)和普通PCR那个灵敏度高

qPCR和普通PCR那个灵敏度高

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发表时间:2024-07-12 16:04

qPCR(实时荧光定量PCR)和普通PCR在灵敏度方面存在显著差异,qPCR的灵敏度通常更高。

qPCR的灵敏度优势

检测原理:qPCR在传统PCR的基础上加入了荧光信号,实现了对PCR扩增过程的实时监测。这种实时监测不仅继承了传统PCR高灵敏度和操作简便的特点,而且通过荧光信号的检测,进一步提高了对样本的定量检测能力。

检测限:qPCR显著降低了系统的检测最低限,使其灵敏度比普通PCR高出1-2个数量级。这意味着qPCR能够检测到更低浓度的目标DNARNA

探针技术:qPCR中使用的荧光探针(如TaqMan探针、分子信标、MGB探针等)进一步提高了检测的特异性和灵敏度。这些探针通过特定的荧光基团和淬灭基团设计,在探针与目标序列杂交时产生荧光信号,从而实现对目标序列的精确检测。

普通PCR的灵敏度

检测原理:普通PCR通过DNA聚合酶催化引物与模板DNA的特异性结合,并进行多次循环的扩增反应,最终产生大量的目标DNA片段。然而,普通PCR的检测通常依赖于后续的电泳分析或其他检测方法,这在一定程度上限制了其灵敏度。

检测限:普通PCR的检测灵敏度相对较低,通常难以检测到极低浓度的目标DNARNA。此外,普通PCR还容易受到非特异性扩增和污染的影响,进一步降低了其灵敏度。

结论

综上所述,qPCR在灵敏度方面明显优于普通PCRqPCR通过实时监测和荧光探针技术,能够检测到更低浓度的目标DNARNA,并且具有更高的特异性和准确性。因此,在需要高灵敏度检测的场合(如病原体检测、基因表达分析等),qPCR是更为合适的选择。

需要注意的是,虽然qPCR的灵敏度更高,但其操作也更为复杂和昂贵。因此,在选择检测方法时需要根据具体实验需求和条件进行综合考虑。


qPCR Kit  (经典法).jpg


德国MB公司生产的支原体qPCR检测试剂盒(均为探针法检测),依据操作步骤的细微差别, 分『经典法』和『一步法』两种。   

此两类试剂盒较全球其他厂家同类产品,具有以下独特的优点:

①经典法qPCR试剂盒遵循欧洲药典流程要求

②高特异性,一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种(涵盖欧洲药典规定的9种支原体),根据序列一致性,至少可以检测到107种支原体物种。操作简单,易于观察(使用MB的试剂盒,下表中列出的支原体物种均为阳性,其他微生物或真核细胞均为阴性,无交叉反应)。


③高灵敏度,MB公司的支原体qPCR检测试剂盒经典法最低检测限可达到≤10CFU/ml。

MB公司的支原体qPCR检测试剂盒一步法最低检测限≥50个基因组/反应。

④MB公司有相应配套的10CFU/100CFU的敏感度测试的标准品,便于方法学验证。

MB公司有相应配套的支原体基因组DNA和细菌基因组DNA,便于特异性验证。

MB公司有相应配套的支原体绝对定量标准品,便于最后定量检测。



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