PCR扩增（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）是一种在体外扩增特定DNA片段的技术。其基本过程包括三个主要步骤：变性、退火和延伸，这三个步骤在一个循环中重复多次，从而实现DNA的指数级扩增。 变性温度：通常将反应体系加热至 94-98°C。目的：高温使双链 DNA 的氢键断裂，两条链解开成为单链，以便引物能够与模板链结合。时间：一般持续 15-30 秒，...
实时定量聚合酶链式反应（Real - time PCR），也称为实时荧光定量 PCR，是一种在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。基因表达定量分析基础研究方面：在分子生物学基础研究中，用于研究基因在不同细胞类型、发育阶段以及不同环境刺激下的表达变化。例如，在胚胎发育研究中，可以利用 Real - time...
光线作为一种重要的环境因素，对细胞培养过程有着复杂而多样的影响。在细胞培养实验中，了解并控制光线条件，对于维持细胞的正常生长、繁殖以及保证实验结果的准确性和可靠性至关重要。一、光线对培养基成分的影响光线会直接作用于细胞培养基中的某些成分，特别是B族维生素（如B2、B12）和芳香族氨基酸（如色氨酸、酪氨酸）。这些成分在光照条件下会发生光化学转化和光降解，导致培养基的性状、性能及储存有效期发生改...
荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）是一种在PCR扩增反应体系中加入荧光基团，对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。以下是荧光定量PCR的原理和步骤的详细解释：一、荧光定量PCR原理荧光定量PCR的基本原理是利用DNA聚合酶在PCR过程中合成新DNA链的特性，结合一种荧光标记的探针或染料，通过实...
Taq DNA聚合酶的**反应温度主要与其催化活性有关。以下是对Taq DNA聚合酶**反应温度的详细分析：一、最适催化温度Taq DNA聚合酶在催化DNA合成时，有一个较高的最适温度范围，通常为7580℃。在这个温度范围内，Taq DNA聚合酶的催化活性最高，延伸速率达到峰值。实验证明，在最适温度下，Taq DNA聚合酶的dNTP掺入速度非常快，可以达到35100 nt/(s·酶分子)，最...
细胞冻存与复苏是一种用于长期储存细胞的技术，其原理和过程分别如下：细胞冻存的原理细胞冻存是指将细胞保存在超低温环境中，暂时停止细胞的代谢活动，使细胞进入“冬眠”状态的一项技术。一般细胞冻存遵循“慢冻”原则，这是因为在降温过程中，细胞器会脱水，细胞内可溶性物质浓度增加，并形成冰晶。缓慢冷冻的过程可以逐渐使细胞脱水，以防止细胞内形成大冰晶，因为大冰晶可能导致细胞膜和细胞器的损伤和破裂。同时，常使...
PCR技术（聚合酶链式反应）需要两种引物的原因主要基于其扩增DNA片段的机制和原理。以下是详细解释：一、PCR技术的基本原理PCR技术是一种在体外酶促扩增特定DNA片段的技术，类似于DNA的天然复制过程。它以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5′端和3′端互补的寡核苷酸为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸至完成新的DNA合成。其主要过程由变性、退火和延伸...
