支原体污染细胞后的检测方法

支原体污染细胞后的检测方法有多种，以下是一些常用的检测方法：

试剂盒检测法：

使用专门用于支原体检测的试剂盒，通过细胞滴片进行检测。

此方法简便快捷，是常用的初步筛选手段。

观察细胞形态和生长特征：

在支原体污染较严重时，可观察到细胞生长减慢，培养基pH变酸，并出现细胞病变。

但由于支原体污染引起的病变特征与病毒感染相似，因此不能作为**诊断依据。

分离培养法：

从可疑的细胞培养体系中取样，并接种到最适宜支原体生长的琼脂平板上。

观察支原体在琼脂平板上的生长情况，形成特征性菌落。

此方法准确度高，被认为是支原体检测的金标准，但检测时间长，至少需要4周时间。

DNA结合荧光素染色法：

利用荧光染剂（如bisbenzimide, Hoechst 33258）对细胞进行染色。

荧光染料会结合到支原体DNA的A-T丰富区域，使支原体DNA在细胞核外与细胞周围呈现许多大小均一的荧光小点。

此方法快速直观，但灵敏度较低，在支原体污染不严重时可能得到模棱两可的结果。

PCR扩增检测法：

使用支原体通用引物对可疑样本进行PCR扩增。

通过凝胶电泳观察特异性条带的出现，以此指示支原体的存在。

此方法灵敏度高，检测速度快，但可能产生假阳性结果，且不能区分支原体的死活。

电子显微镜和免疫电子显微镜法：

在电子显微镜或免疫电镜下对样本进行观察。

此方法准确度高，但受条件限制，检测时间长，敏感性不高。

酶学检测法：

将可疑样本添加到特定底物中，利用支原体的酶将ADP转化为ATP，随后利用能发光的luciferase酶指示支原体的存在。

此方法检测速度快，但灵敏度较低，且需要的检测仪器尚未普及。

此外，还有间接免疫荧光法和免疫印迹等方法，这些方法也具有简便、快速、特异性强等特点。

在选择检测方法时，应根据实验室条件、检测时间要求、灵敏度需求等因素综合考虑。同时，为了预防支原体污染，应严格控制实验环境，规范实验操作，确保细胞培养基和器材的无菌状态。对于新引进的细胞系应进行检测，防止引入外来的污染源。对于冻存的细胞，在冻存之前或放入液氮之前进行检测，以免将含支原体的细胞作为种源保存。