PCR Clean™祛除RNases的效果检测

科研人员测试了PCR Clean™（喷雾和预湿湿巾）祛除玻璃表面RNases的能力。

简单地说，将RNase A（5µl，0.03 U/ml甘油，Thermo Fisher Scientific, Cat.No.AM1964）转移到先前净化过的玻璃表面上，并在室温下孵育30分钟。

接下来，用干燥纸巾、PCR Clean™ Wipes或用含有70%异丙醇、PCR Clean™或市售的RNase去污剂RNaseZap®（Thermo Fisher Scientific, Cat.No.AM1964）的纸巾擦拭实验点，15秒接触时间后可重复擦拭。

在控制条件下进行RNase污染后，50µl无核酸酶的H₂O (Thermo Fisher Scientific, Cat； No.AM1964)添加到预污染点并上下移液10次以收集任何存在的RNase。

然后将这些样品中的45µl用于市售的荧光检测RNaseAlert®（Thermo Fisher Scientific, Cat.No.AM1964）。该试剂盒是按照制造商的建议使用的。随后，在37°C孵育期间测量原始荧光（ex 490/em 520），最多每5分钟一次。使用CFX96 Touch™（Bio-Rad） 2小时。

实验结果，在表面清洁或未清洁后，使用市售的基于荧光的RNase活性测定来评估RNase的有效祛除。在分析之前，通过彻底的点移液对表面进行取样，包括省略RNase（阴性对照）或擦拭（阳性对照）的表面，并用基于荧光的方法RNaseAlert®（ThermoFisher Scientific）进行分析。在未进行擦拭的样品中，始终观察到严重污染的RNase活性（图6A，紫色曲线，代表性结果）。与阴性对照组一样，当没有测量到RNase的残留活性时，认为净化完成。

就荧光信号而言，根据试剂盒制造商的建议，将截止值定义为阴性对照荧光的2.5倍（图6A，红色虚线）。基于该参数，在至少2或3个重复实验中，省略擦拭步骤、使用干纸巾或用70%异丙醇润湿的毛巾不会抑制RNase的活性（表6和图6）。为了更好地突出阴性对照和其他清洁方法之间的差异，图6B中显示了图6A（黑色矩形）的相应缩放区域。只有在用PCR Clean™（预湿湿巾和浸湿的纸巾）或RNaseZap®浸湿的纸巾擦拭后，才能实现显著和可重复的去污，即使在37°C下孵育2小时后，荧光水平也很低（图6和表6）。