怎么处理细胞培养支原体污染?怎么处理细胞培养支原体污染 二维码
发表时间:2024-12-12 17:27 细胞培养过程中支原体污染是一个常见且棘手的问题。支原体是一种无细胞壁、大小仅为0.20.3um的原核生物,可透过一般过滤膜(0.220.45um),在细胞培养中容易隐匿传播并造成污染。以下是对细胞培养支原体污染的处理方法: 一、识别污染 观察细胞状态:支原体污染通常表现为细胞生长缓慢、形态异常、培养基变浑浊等现象。 检测手段: PCR检测:根据支原体基因组内的保守序列设计特异引物,对待检样品的核酸进行扩增,通过对扩增产物的大小分析作出诊断。PCR检测技术用于支原体污染的检测,具有周期短、灵敏度高、特异性好、操作简单的优点,且一次可检测大量样品。 荧光显微镜观察:使用荧光标记的DNA探针特异性结合支原体的DNA或RNA,然后在荧光显微镜下观察。 培养检测:将样本接种到支原体专用培养基中,观察是否有生长。 二、处理污染 隔离受污染的细胞:将受污染的细胞系从培养箱中移出,并妥善处理,避免污染扩散。 清理培养环境:彻底清洗培养箱、工作台等实验环境,使用70%的酒精或Mycoplasma Off™支原体祛除喷雾剂即用型,该支原体喷雾中中含有支原体专用杀除剂Mynox®,可在几分钟内迅速杀除支原体。 消毒处理: 紫外线照射:利用紫外线对培养箱内部进行照射,破坏支原体的DNA结构,达到杀菌效果。 臭氧消毒:臭氧具有强氧化性,可以氧化分解支原体,达到消毒目的。 甲醛熏蒸:甲醛可以与支原体中的蛋白质发生反应,使其变性失活,但需要注意甲醛的残留和毒性问题。 验证消毒效果:消毒完成后,再次进行PCR检测或培养检测,确保支原体污染已被彻底消除。 三、挽救受污染的细胞(针对重要细胞) 对于珍贵的或不可再得的细胞系,可以尝试以下方法进行挽救: 使用支原体清除剂ZellShield®直接用于培养基的细胞支原体去除剂。除此之外,ZellShield®也用于保护细胞培养免受细菌、真菌、酵母和支原体等广泛常见污染物的影响,。 清洗纯化法:通过细胞营养驯化、优质细胞群的筛选、细胞清洗和反复离心洗涤等方法,利用离心力、细胞、微生物质量和悬液的浮力差达到清除支原体的目的。结合敏感抗生素的抑杀作用,可达到更好的效果。 药物辅助加温处理:先用药物处理后,再将污染的组织培养物放在41℃培养18小时,可杀死支原体,但对细胞有不良影响。 四、预防再次污染 为了避免支原体污染的再次发生,需要采取以下预防措施: 严格无菌操作:在细胞培养过程中,严格遵守无菌操作规范,避免手部接触细胞培养物。 定期清洁和消毒:定期对培养箱、工作台等实验设备进行清洁和消毒处理。 检查试剂和培养基:使用前对试剂和培养基进行支原体检测,确保无污染。 加强实验室管理:建立完善的实验室管理制度,规范实验操作、物品管理、环境维护等方面的工作。 综上所述,细胞培养支原体污染的处理需要严格的生物安全措施和细心的实验操作。通过识别污染、处理污染以及采取预防措施,可以有效地避免支原体污染的扩散和复发。
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支原体祛除
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