病毒检测Kit（RT-qPCR法）（新冠病毒推荐）介绍和操作步骤

来自德国MB公司的RNA病毒检测试剂盒（RT-qPCR法）（英文名：ConviFlex™RT-Taq mix）用于定性检测和分析RNA病毒和RNA分子，特别适合检测新冠病毒等此类病毒。缔一生物作为MB公司国内总代理，为大家介绍RNA病毒检测（RT-qPCR法）试剂的操作步骤。

步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix，离心5秒钟，然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer，室温静置5分钟后，涡旋并离心5秒钟，分装，待用或-18℃保存。

步骤2.   每个反应体系为20µl，其中反应mix为15µl。

（1）依据本次试验样本数，制备RT-qPCR的反应mix。

1个反应mix需要：

①ConviFlex™ RT-Taq Mix（即上面复溶的预混液）10µl，

②引物（浓度0.1 - 0.5 µM）

③探针（浓度0.1 - 0.5 µM）

④PCR级水（使每管总体积为15µl）

注：引物和探针的推荐浓度范围是0.1-0.5 μM。

通常，引物浓度过高，会增加引物错配和非特异RT-PCR产物。然而，当RT-PCR程序运行时间较长或使用简并引物时，则推荐引物浓度升高至1 μM。（注意：若使用简并引物，同一RT-PCR分析中，引物之间应具有相同的熔解温度）

（2）将反应mix涡旋并离心5秒钟。

（3）每个PCR管中加入15μl反应mix和5μl样本（抽提后的RNA），
或5μl RNA提取试剂盒中的洗脱缓冲液，作为阴性对照，或5μl PCR级水作为无模板对照，或5μl阳性对照。

（4）扣紧PCR管，然后短暂离心。

（5）将PCR管放置qPCR仪上，盖好盖。

步骤3. 在qPCR仪上设置反应程序，示例:   1 cycle   50 °C for 20 min

1 cycle   95 °C for 10 min

45 cycles 95 °C for 15 sec

60 °C for 1 min

    (以上程序仅依据厂家经验，用户可根据实际情况调整温度和孵育时间)

步骤4. 启动程序。

综上所述，您是不是已经对RNA病毒检测（RT-qPCR法）试剂的操作步骤，有所了解。了解更多Ausbian血清和Minerva微生物污染控制试剂，欢迎访问缔一生物官网：www.dyshengwu.com。