细胞培养中支原体高效检测法——支原体qPCR检测

细胞培养中支原体高效检测法——支原体qPCR检测。

　　支原体放行检测，在临床相关的项目中发挥着重要作用。常见的一些研究，如干细胞治疗项目、免疫细胞治疗项目研究、CAR-T项目研究、抗体药研究、疫苗等领域，以及还有一些重要的细胞培养、细胞典藏项目，也都需要对培养的细胞或收获的产物，进行准确度较高的支原体检测，以保证产物没有支原体污染。

　　由于临床项目研究的时效性与安全性，对于支原体检测的效率以及准确度都有比较搞得要求。本期内容，盘点高效得支原体检测方法，一共分几步!

　　Part.01 支原体DNA提取　

　　如果样品得细胞培养液中，存在抑制PCR的物质，比如较高浓度的血清浓度(超过12%)，则容易对下游的PCR反应会产生抑制，此时就需要对样品进行预处理，也就是对支原体DNA进行提取处理，以减轻对PCR反应的影响。

　　另外，酚红、细胞团、疫苗、冻存细胞和石蜡包埋的组织，也会对qPCR的检测产生干扰，因此也需要提前对支原体DNA进行提取

　　如果样品中蛋白含量高于10mg/ml，则先需将样品预先用蛋白酶K进行处理。

　　Miverva Biolabs公司的支原体DNA提取试剂盒，通过对DNA的提取，来提高检测的准确率。

　　Minerva Biolabs公司生产的Venor®GeM Sample Preparation Kit可从细胞上清和生物制品中分离支原体DNA，全程只需30分钟。

　　分四步组成：细胞溶解，DNA特异性与层析柱结合，祛除残留的污染物和抑制剂，洗脱DNA。该试剂盒符合欧洲药典规范。

　　Part.02　　支原体qPCR检测

　　药典中记载的传统的支原体检查方法，如培养法和DNA染色法，都存在一定的局限：培养法大约需要7-29天，DNA染色法大约需要4-14天才能出结果，所需时间较长，且DNA染色法还存在假阳性和假阴性情况。

　　支原体核酸检测法(包括常规PCR和荧光定量PCR，简称qPCR)是一种较早被国外采用的检测方法，以其操作时间短(仅需2-3小时)、灵敏度和特异性高而深受相关从业人员的喜爱，药典中也明确指出，经过验证，核酸法可替代指示细胞法进行支原体检测。

　　国内外药厂放行检测(product release testing)采用的较多的是德国Minerva Biolabs(简称MB)公司的Venor® Gem qEP (qPCR法)，无须跑胶，且能定量，使用起来更为便捷，通过欧洲药典和日本药典的方法学验证。　　

　　Part.03　　支原体标准品

　　标准品就像支原体检测过程中的一把标尺，能够衡量方法是否达到标准，合乎要求。药典中也规定了，如果要用核酸法替代药典方法，也需要进行验证，即灵敏度、特异性以及耐用性等都需要达到指定的要求。方法达到要求之后才能够用于质检部门对样品的检查。

　　德国MB公司(Minerva Biolabs)提供有三类标准品：灵敏度标准品、特异性验证用标准品，以及支原体DNA。

　　标准品与支原体DNA提取试剂盒、支原体qPCR检测试剂盒，共同构成完整的检测体系，帮助从业者实现高效便捷准确的支原体检测。

北京缔一生物科技有限公司国内总代Ausbian品牌,德国Minerva-Biolabs微生物污染控制系列。细胞培养实验使用的Ausbian澳洲进口特级胎牛血清,新生牛血清，干细胞培养基,马血清，德国MB支原体检测/祛除试剂盒,DNA污染祛除试剂,支原体PCR/qPCR定量试盒等产品。欢迎访问缔一生物官网：www.dyshengwu.com。联系电话:4006661688.