支原体检测试剂盒说明书——支原体qPCR检测试剂盒说明书下载

支原体检测对于工业和生物制药和生物医学来说来说都很重要。支原体检测qPCR法是一种快速、敏感、特异性高的细胞支原体检测方法。

德国MB支原体qPCR检测试剂盒 货号11-91025,通过《欧洲药典》和《日本药典》的方法学验证，灵敏度高，特异性高，一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种（涵盖欧洲药典规定的9种支原体），根据序列一致性，至少可以检测到107种支原体物种。详细德国MB支原体qPCR检测试剂盒说明书下载可直接点击。

德国MB支原体qPCR检测试剂盒经典法用于细胞和生物制品及其生产过程中支原体污染的检测。检测迅速，2-3小时即可出结果。可以配合支原体DNA提取试剂盒、支原体标准品一起使用。

德国MB Venor®GeM支原体检测试剂盒（qPCR一步法）该试剂盒包括4管试剂，其中2管分别为缓冲液和PCR水，另2管为最主要试剂。1管即mix，含引物、核苷酸、聚合酶、荧光素标记的探针和内部扩增对照。另1管为阳性对照，均为冻干粉。

德国MB Venor®GeM支原体检测试剂盒（qPCR一步法）它通过扩增高度保守的rRNA操纵子，或者更准确地说，扩增支原体基因组中的16S rRNA编码区，可以特异性地检测支原体。在520nm（FAMTM通道）检测支原体特异性扩增片段。在610nm（HEXTM通道）检测内部扩增对照的扩增。它能特异性检测所有导致细胞污染的柔膜体物种。真核DNA不会被扩增。通过内部对照，可检测PCR抑制剂的存在或不正确的DNA提取引起的假阴性结果。样本为细胞培养上清液。检测程序可在3小时内完成。

在检测前，样本需要一定的制备。具体是将100μl细胞培养上清液转移至无菌的1.5 ml反应管中。关上盖子扣紧。将样品在95°C下孵育5分钟。以**速度短暂离心样品（15秒）以沉淀任何细胞碎片。然后可直接取2μl上清液进行qPCR。

qPCR反应体系一共是25ul，其中样本2ul，其余是master mix。注意设置阳性对照、阴性对照（无模板对照）。

如果检测的Ct<40，则表明PCR结果阳性。如果检测的Ct≥40，则PCR反应结果为阴性。如果FAM阳性，则支原体阳性。如果FAM阴性，HEX也阴性，表明PCR扩增出了问题，需要重做。如果FAM阴性，HEX阳性，表明支原体确实阴性。

PCR扩增出了问题主要原因为PCR反应被抑制了，可能需要考虑做DNA抽提。

在qPCR反应中，引物和探针的设计尤为重要，它既需要覆盖大多数支原体，又需要不与细菌和哺乳动物细胞DNA发生交叉反应。当然，Taq酶的性能也很重要，因为DNA的扩增最终依赖于酶的活性和扩增的速度。从这个角度说，一个好的qPCR试剂盒是各个因素共同作用的结果。

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