水中微生物DNA提取试剂盒
AquaScreen® Fast Extract
品名 | 货号 | 规格 |
水中微生物DNA抽提Kit 英文名:AquaScreen® Fast Extract | 32-1010 32-1050 | 10次/盒 50次/盒 |
一、产品用途:
水中微生物DNA提取试剂盒(英文名:AquaScreen® Fast Extract)用于从水样中提取微生物DNA。该试剂盒遵循ISO/TS 12869:2012的设计要求。提取的DNA可用于下游的PCR或qPCR检测。
二、工作原理:
该试剂盒采用0.4μm滤膜截获微生物,然后微生物被加入到滤膜上的离子活性剂和促溶剂裂解。随后进行DNA抽提。
DNA抽提由四步组成:
1. 菌体裂解
2. DNA与离心柱的特异结合
3. 祛除残留污染物和抑制剂
4. DNA的洗脱
整个过程大约30分钟。
三、产品组成:
试剂盒组分 | 试剂盒(10次/盒) | 试剂盒(50次/盒) |
| 组分数量 | 组分数量 |
Membrane Filter(滤膜) | 10张 | 50张 |
Incubation Dishes(平皿) | 10块 | 50块 |
Incubation Tubes(孵育管) | 10管 | 50管 |
Spin Columns(离心柱) | 10管 | 50管 |
Collection Tubes(收集管) | 20管 | 100管 |
Sample Storage Tubes(样本保存管) | 10管 | 50管 |
Lysis Buffer(裂解液) | 25ml×1瓶 | 110ml ×1瓶 |
Binding Buffer(结合液) | 10ml×1瓶 | 25ml×1瓶 |
Wash Buffer 1(洗液1) | 3ml×1管(**次用前加3ml无水乙醇) | 15ml×1瓶(**次用前加15ml无水乙醇) |
Wash Buffer 2(洗液2) | 4ml ×1管(**次用前加16ml无水乙醇) | 12ml×1瓶(**次用前加48ml无水乙醇) |
Elution Buffer(洗脱液) | 2ml×1管 | 2ml×2管 |
注: 批次质控证书(COA)可从MB厂家网站(http://www.dyshengwu.com)下载
或向MB中国区总代理缔一生物(http://www.dyshengwu.com)索取。
四、需用户自己准备的试剂耗材和仪器:
1. 水过滤设备(滤器、真空泵等)(详情参见附录)
2. 无水乙醇
3. 反应管(1.5ml或2ml)
4. 离心机
5. 恒温仪
6. 移液器及带滤芯吸头(100l和1000l)
7. 恒温箱
五、样本制备须知:
1. 饮用水、浴池水、泳池水及废水可作为样本。样本性状会影响结果的可靠性,并需要与ISO的水样采集指南一致(ISO Norm 5667-1至5667-10)。
2. 该试剂盒还适合其他类型的水样本,如海水样本。但海水样本可能有重度的颗粒污染,会降低流速,导致淤积。可预先用常规滤纸过滤。该方法对于处理自来水,以检测自来水中的军团菌,效果很好。
3. 水样应在2-8°C保存,在采集的2天内检测。不推荐使用防腐剂,因为会使菌体裂解,而滤膜只能截留完整的菌体。
4. 凡是水样中有悬浮颗粒或固定挥发性成分,则需先用滤纸过滤。
5. 样本不能离心。
6. 该试剂盒所需样本体积建议为1000ml。样本体积最少应为100ml。
7. 该试剂盒不会截获水中游离的DNA。
8. 该试剂盒不能区分“活的可培养微生物”与“活的不可培养微生物”。
六、操作注意事项:
该试剂盒只用于科研,并且应仅由经过培训的实验室人员使用。
所有样本应视为有潜在危害性,应小心处理。
应始终穿上合适的防护服,戴一次性手套和护目镜。
请勿向废弃液体中加漂白剂或酸性溶液。如有液体溅出,请用合适的去污剂和清水处理。
废弃物可根据当地法规进行处理。
Binding Buffer(结合液)含异丙醇和聚乙二醇辛基苯酚醚,易燃、有害、有腐蚀性。
Wash Buffer 1(洗液1)含硫氰酸胍,有害、有腐蚀性。
七、样本制备步骤:
(一)操作步骤概览

(二)操作步骤详解
步骤1. 样本过滤
1.1 从试剂盒中小心取出滤膜。用水样润湿滤膜。
1.2 将滤膜放置在滤器中,并过滤必要体积的水样。
步骤2. 菌体裂解
* 提前准备:预先将恒温仪设置到70℃,将恒温箱设置到37℃。
2.1将样本过滤后的滤膜翻转放置到试剂盒提供的Incubation Dish(平皿)中。
2.2 吸取2ml lysis buffer(裂解液),并加到滤膜上。
2.3 将滤膜浸泡在裂解液中,小心摇匀平皿并在37°C孵育30分钟。
2.4 用平皿中的裂解液冲洗滤膜,并摇晃平皿10秒钟。
2.5 将平皿中的400 μl裂解液转移至Incubation Tube(孵育管),70 °C孵育10分钟。
2.5a可选项:剩余裂解液可再取400μl用于DNA抽提,以获得更多的DNA样本。
2.6 样本短暂离心,并加入400 μl Binding Buffer(结合液),立即涡旋充分混匀,以防止DNA沉淀。请勿离心样本,并立即进行下一步。
步骤3. DNA提取
* 提前准备:(1)Wash Buffer 1(洗液1)和Wash Buffer 2(洗液2)**次使用前,用无水乙醇复溶(请参见瓶上标签)
(2)将恒温仪设置到70℃,并将Elution Buffer(洗脱液)放在上面预热。
3.1 将步骤2.6中的混合液(~800 μl)转移到Collection Tube(收集管)内的Spin Column(离心柱)中,小心液体不要沾到离心柱的边缘。
3.2 离心柱离心≥10000 × g,1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。
3.2a 可选择:在步骤2.5a中,多取的一份样本重复以上操作,不用换离心柱。
3.3 离心柱中加入500μl洗液1。离心≥10000×g,1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。
3.4 离心柱中加入500μl洗液2。离心≥10000×g,1分钟。弃掉收集管中的液体。将离心柱插到一个新的收集管中。
3.5**速度离心3分钟,以去除残留的洗液2。
3.6弃掉收集管。将离心柱插入到试剂盒提供的Sample Storage Tube(样本保存管)中。
3.7吸取60μl已70℃预热的洗脱液,直接加到离心柱的硅胶膜上。硅胶膜表面应全部覆盖洗脱液。
3.8室温静置2分钟,然后离心8000×g,2分钟,以洗脱DNA。
3.9样本保存管中的洗脱液即包含DNA,可直接用于PCR,或储存在2~8℃,可存放1周。长期储存是在≤-18℃。
八、样本中的细菌数量计算
样本中的细菌定量需使用PCR定量标准品和qPCR检测试剂盒(推荐使用德国MB的PCR定量标准品和AquaScreen®qPCR检测试剂盒,详见“九、水中细菌精准测定,还需要的相关试剂”)
计算公式:基因组拷贝数/反应 × 比例因子× 校正因子×
= 微生物数量/升
注:
1. 样本中的基因组拷贝数:可通过标准曲线定量
2. 比例因子:取1份400l裂解液,比例因子=5
取2份400l裂解液,比例因子=2.5
取3份400l裂解液,比例因子=1.67
3. 校正因子:60l洗脱液中取10l用于qPCR反应,校正因子=6
九、水中细菌精准测定,还需要的相关试剂:
品牌 | 品名 | 货号 | 规格 |
德国MB | 水中军团菌qPCR检测试剂盒 英文名:AquaScreen® Legionella species | 33-2025 | 25次/盒 |
33-2100 | 100次/盒 |
33-3250 | 250次/盒 |
德国MB | 水中嗜肺军团菌qPCR检测试剂盒 英文名:AquaScreen® Legionella pneumophila | 34-2025 | 25次/盒 |
34-2100 | 100次/盒 |
34-2250 | 250次/盒 |
德国MB | 水中铜绿假单胞菌qPCR检测试剂盒 英文名:AquaScreen® Pseudomonas aeruginosa | 34-6025 | 25次/盒 |
34-6100 | 100次/盒 |
34-6250 | 250次/盒 |
德国MB | 水中大肠埃希菌qPCR检测试剂盒 英文名:AquaScreen® Escherichia coli | 34-7025 | 25次/盒 |
34-7100 | 100次/盒 |
34-7250 | 250次/盒 |
德国MB | 嗜肺军团菌基因组DNA定量标准品 英文名:Legionella pneumophila PCR Quantification Standards | 52-0101 | 1×108 基因组拷贝/管+缓冲液2ml/管×3管/盒 |
德国MB | 铜绿假单胞菌基因组DNA定量标准品 英文名:Pseudomonas aeruginosa PCR Quantification Standards | 52-0071 |
更多详情可访问,德国MB官网:www.minervabiolabs.com
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