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水中微生物DNA抽提Kit

 
英文: AquaScreen Fast Extract
货号: 32-1010
品牌: Minerva-Biolabs®
规格: 10次/盒
用途: 用于从水样中提取微生物DNA
价格:
****
产品详情
产品说明书
应用文章

水中微生物DNA提取试剂盒

AquaScreen® Fast Extract


品名

货号

规格

水中微生物DNA抽提Kit

英文名:AquaScreen® Fast Extract

32-1010

32-1050

10次/盒

50次/盒


一、产品用途:

水中微生物DNA提取试剂盒(英文名:AquaScreen® Fast Extract)用于从水样中提取微生物DNA。该试剂盒遵循ISO/TS 12869:2012的设计要求。提取的DNA可用于下游的PCR或qPCR检测。


二、工作原理:

该试剂盒采用0.4μm滤膜截获微生物,然后微生物被加入到滤膜上的离子活性剂和促溶剂裂解。随后进行DNA抽提。


DNA抽提由四步组成:

1. 菌体裂解

2. DNA与离心柱的特异结合

3. 祛除残留污染物和抑制剂

4. DNA的洗脱

整个过程大约30分钟。


三、产品组成:

试剂盒组分

试剂盒(10次/盒)

试剂盒(50次/盒)


组分数量

组分数量

Membrane Filter(滤膜)

10张

50张

Incubation Dishes(平皿)

10块

50块

Incubation Tubes(孵育管)

10管

50管

Spin Columns(离心柱)

10管

50管

Collection Tubes(收集管)

20管

100管

Sample Storage Tubes(样本保存管)

10管

50管

Lysis Buffer(裂解液)

25ml×1瓶

110ml ×1瓶

Binding Buffer(结合液)

10ml×1瓶

25ml×1瓶

Wash Buffer 1(洗液1)

3ml×1管(**次用前加3ml无水乙醇)

15ml×1瓶(**次用前加15ml无水乙醇)

Wash Buffer 2(洗液2)

4ml ×1管(**次用前加16ml无水乙醇)

12ml×1瓶(**次用前加48ml无水乙醇)

Elution Buffer(洗脱液)

2ml×1

2ml×2管


注: 批次质控证书(COA)可从MB厂家网站(http://www.dyshengwu.com)下载

或向MB中国区总代理缔一生物(http://www.dyshengwu.com)索取。


四、需用户自己准备的试剂耗材和仪器:

1. 水过滤设备(滤器、真空泵等)(详情参见附录)

2. 无水乙醇

3. 反应管(1.5ml或2ml)

4. 离心机

5. 恒温仪

6. 移液器及带滤芯吸头(100l和1000l)

7. 恒温箱


五、样本制备须知:

1. 饮用水、浴池水、泳池水及废水可作为样本。样本性状会影响结果的可靠性,并需要与ISO的水样采集指南一致(ISO Norm 5667-1至5667-10)。

2. 该试剂盒还适合其他类型的水样本,如海水样本。但海水样本可能有重度的颗粒污染,会降低流速,导致淤积。可预先用常规滤纸过滤。该方法对于处理自来水,以检测自来水中的军团菌,效果很好。

3. 水样应在2-8°C保存,在采集的2天内检测。不推荐使用防腐剂,因为会使菌体裂解,而滤膜只能截留完整的菌体。

4. 凡是水样中有悬浮颗粒或固定挥发性成分,则需先用滤纸过滤。

5. 样本不能离心。

6. 该试剂盒所需样本体积建议为1000ml。样本体积最少应为100ml。

7. 该试剂盒不会截获水中游离的DNA。

8. 该试剂盒不能区分“活的可培养微生物”与“活的不可培养微生物”。


六、操作注意事项:

该试剂盒只用于科研,并且应仅由经过培训的实验室人员使用。

所有样本应视为有潜在危害性,应小心处理。

应始终穿上合适的防护服,戴一次性手套和护目镜。

请勿向废弃液体中加漂白剂或酸性溶液。如有液体溅出,请用合适的去污剂和清水处理。

废弃物可根据当地法规进行处理。

Binding Buffer(结合液)含异丙醇和聚乙二醇辛基苯酚醚,易燃、有害、有腐蚀性。

Wash Buffer 1(洗液1)含硫氰酸胍,有害、有腐蚀性。


七、样本制备步骤:

(一)操作步骤概览

(二)操作步骤详解

步骤1. 样本过滤

1.1 从试剂盒中小心取出滤膜。用水样润湿滤膜。

1.2 将滤膜放置在滤器中,并过滤必要体积的水样。

步骤2. 菌体裂解

* 提前准备:预先将恒温仪设置到70℃,将恒温箱设置到37℃。

2.1将样本过滤后的滤膜翻转放置到试剂盒提供的Incubation Dish(平皿)中。

2.2 吸取2ml lysis buffer(裂解液),并加到滤膜上。

2.3 将滤膜浸泡在裂解液中,小心摇匀平皿并在37°C孵育30分钟。

2.4 用平皿中的裂解液冲洗滤膜,并摇晃平皿10秒钟。

2.5 将平皿中的400 μl裂解液转移至Incubation Tube(孵育管),70 °C孵育10分钟。

2.5a可选项:剩余裂解液可再取400μl用于DNA抽提,以获得更多的DNA样本。

2.6 样本短暂离心,并加入400 μl Binding Buffer(结合液),立即涡旋充分混匀,以防止DNA沉淀。请勿离心样本,并立即进行下一步。

步骤3. DNA提取

* 提前准备:(1)Wash Buffer 1(洗液1)和Wash Buffer 2(洗液2)**次使用前,用无水乙醇复溶(请参见瓶上标签)

(2)将恒温仪设置到70℃,并将Elution Buffer(洗脱液)放在上面预热。

3.1 将步骤2.6中的混合液(~800 μl)转移到Collection Tube(收集管)内的Spin Column(离心柱)中,小心液体不要沾到离心柱的边缘。

3.2 离心柱离心≥10000 × g,1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。

3.2a 可选择:在步骤2.5a中,多取的一份样本重复以上操作,不用换离心柱。

3.3 离心柱中加入500μl洗液1。离心≥10000×g,1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。

3.4 离心柱中加入500μl洗液2。离心≥10000×g,1分钟。弃掉收集管中的液体。将离心柱插到一个新的收集管中。

3.5**速度离心3分钟,以去除残留的洗液2。

3.6弃掉收集管。将离心柱插入到试剂盒提供的Sample Storage Tube(样本保存管)中。

3.7吸取60μl已70℃预热的洗脱液,直接加到离心柱的硅胶膜上。硅胶膜表面应全部覆盖洗脱液。

3.8室温静置2分钟,然后离心8000×g,2分钟,以洗脱DNA。

3.9样本保存管中的洗脱液即包含DNA,可直接用于PCR,或储存在2~8℃,可存放1周。长期储存是在≤-18℃。


八、样本中的细菌数量计算

样本中的细菌定量需使用PCR定量标准品和qPCR检测试剂盒(推荐使用德国MB的PCR定量标准品和AquaScreen®qPCR检测试剂盒,详见“九、水中细菌精准测定,还需要的相关试剂”)

计算公式:基因组拷贝数/反应 × 比例因子× 校正因子×  = 微生物数量/升

注:


1. 样本中的基因组拷贝数:可通过标准曲线定量

2. 比例因子:取1份400l裂解液,比例因子=5

取2份400l裂解液,比例因子=2.5

取3份400l裂解液,比例因子=1.67

3. 校正因子:60l洗脱液中取10l用于qPCR反应,校正因子=6


九、水中细菌精准测定,还需要的相关试剂:


品牌

品名

货号

规格

德国MB

水中军团菌qPCR检测试剂盒

英文名:AquaScreen® Legionella species

33-2025

25次/盒

33-2100

100次/盒

33-3250

250次/盒

德国MB

水中嗜肺军团菌qPCR检测试剂盒

英文名:AquaScreen® Legionella pneumophila

34-2025

25次/盒

34-2100

100次/盒

34-2250

250次/盒

德国MB

水中铜绿假单胞菌qPCR检测试剂盒

英文名:AquaScreen® Pseudomonas aeruginosa

34-6025

25次/盒

34-6100

100次/盒

34-6250

250次/盒

德国MB

水中大肠埃希菌qPCR检测试剂盒

英文名:AquaScreen® Escherichia coli

34-7025

25次/盒

34-7100

100次/盒

34-7250

250次/盒

德国MB

嗜肺军团菌基因组DNA定量标准品

英文名:Legionella pneumophila PCR Quantification Standards

52-0101

1×108

基因组拷贝/管+缓冲液2ml/管×3管/盒

德国MB

铜绿假单胞菌基因组DNA定量标准品

英文名:Pseudomonas aeruginosa PCR Quantification Standards

52-0071



更多详情可访问,德国MB官网:www.minervabiolabs.com

中国总代理北京缔一生物官网:www.dyshengwu.com

咨询及订购热线:400-166-8600


(缔一生物)

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